彩虹預(yù)染超低分子量蛋白質(zhì)Marker II（3-40 kD）
Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight
Protein Marker II（3-40 kD）
●產(chǎn)品編號(hào)及規(guī)格：
RTD6145-01 10 T（50 μl）
RTD6145-02 50 T（250 μl）
● 儲(chǔ)存條件：
-20℃保存，有效期12個(gè)月
● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
彩虹預(yù)染超低分子量蛋白質(zhì)Marker II可以直接觀察蛋白電泳及清晰判斷Western Blotting的轉(zhuǎn)膜效果。本產(chǎn)品由9種多肽和蛋白質(zhì)組成，分子量大小為 3 kD，4.2 kD，6.5 kD，10 kD（綠色），15 kD，20 kD，25 kD，30 kD，40 kD（紅色） (注：蛋白大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非預(yù)染蛋白Marker標(biāo)定過(guò)。)。
● 使用說(shuō)明：
第一次收到該產(chǎn)品，常溫融化后，徹底混勻，離心快甩將溶液完全收集到管底。
一. 制膠：
I 配制分離膠
1．按照表一將不同體積的雙蒸水、40% PAA（19:1）、凝膠緩沖液和乙二醇加入到小燒杯中混合。
2．加入10%APS和TEMED，立即混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。
3．在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液，然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1
cm的無(wú)水乙醇，使凝膠表面保持平整。
4．靜置15-30分鐘，待分離膠和乙醇層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。
表一 （一塊1 mm mini膠用量）
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分離膠
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濃縮膠
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18％T, 5%C /5 ml
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5％T, 3.3%C/2 ml
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40% PAA（19:1）
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2.25 ml
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/
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40% PAA (29:1)
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/
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0.25 ml
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4×凝膠緩沖液
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1.25 ml
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0.5 ml
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乙二醇（電泳級(jí)）
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1.5 ml
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/
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ddH2O
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/
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1.25ml
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10％APS
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50 μl
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20 μl
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TEMED
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5 μl
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2 μl
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II 配制濃縮膠
去除覆蓋在分離膠上的乙醇層，用濾紙將殘留乙醇吸去。
1．按照表一將不同體積的雙蒸水、40%PAA（29:1）和凝膠緩沖液加入到小燒杯中混合。
2．加入10%過(guò)硫酸銨和TEMED，立即混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。
3．將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。
4．靜置30-60分鐘裝待凝膠聚合
二. 電泳：
1. 取Marker樣品，充分混勻后備用。不要加熱處理。
2. 電泳前，將10×陽(yáng)極緩沖液（Cat No：AB080）和10×陰極緩沖液（Cat No：CB010）用蒸餾水稀釋成1×緩沖液備用。將電泳槽的外槽加入1×陽(yáng)極緩沖液，內(nèi)槽加入1×陰極緩沖液，輕柔拔出梳子，將Marker或蛋白樣品（已經(jīng)過(guò)2×Tricine上樣緩沖液[Cat No：TP050]處理）加入點(diǎn)樣孔，參考下表進(jìn)行電泳，至每條帶都清晰可見時(shí)停止電泳。整個(gè)電泳過(guò)程大約需要2-3個(gè)小時(shí)。
表二 多肽電泳條件
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恒電壓
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150V
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起始電流
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60-75mA/板膠
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結(jié)束電流
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15-25mA/板膠
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電泳時(shí)間
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2.5-3小時(shí)
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三. 染色
根據(jù)常規(guī)實(shí)驗(yàn)步驟，用配方6和7（表三）進(jìn)行染色和觀察。如果使用配方6進(jìn)行染色時(shí)效果不好或考慮其毒性，請(qǐng)選擇本公司的考馬斯亮藍(lán)蛋白膠快速染色液（Cat No：RTD6201），該產(chǎn)品除具有染色快，無(wú)毒，靈敏性高等特點(diǎn)外，還能對(duì)小肽在染色中起到固定作用，不至于小肽在染色和脫色中從凝膠中脫離，是常規(guī)染色液的理想替代品。
注：預(yù)染蛋白Marker由于嵌合了染料，在不同的凝膠系統(tǒng)中遷移率會(huì)有不同，因此只能用來(lái)粗略估計(jì)目的蛋白的大小。如要精確確定蛋白的大小，請(qǐng)?jiān)谕荒z系統(tǒng)中用非預(yù)染蛋白Marker來(lái)標(biāo)定預(yù)染蛋白Marker的分子量。
表三 小分子蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳試劑配制
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1. 40%PAA（29:1）（配制濃縮膠）
貨號(hào)： AC2914
丙稀酰胺 38.67g
甲叉雙丙稀酰胺 1.33g
用ddH2O溶解后定容至100
ml，過(guò)濾后使用。
貯存：4℃
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2. 40% PAA（19:1） （配制分離膠）
貨號(hào)：AC1914
丙稀酰胺 38 g
甲叉雙丙稀酰胺 2 g
用ddH2O溶解后定容至100
ml，過(guò)濾后使用。
貯存：4℃
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3. 4×凝膠緩沖液（配制凝膠用）
貨號(hào)：GB010
[3 M Tris; 0.4% SDS; pH8.45]
Tris堿 36.3 g；ddH2O 80ml
0.4
g SDS或4 ml 10％ SDS
用HCl調(diào)pH值至8.45；用ddH2O定容至100
ml
貯存：4℃
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4. 10×陽(yáng)極緩沖液（下槽緩沖液）
貨號(hào)：AB080
[2
M Tris pH8.9]
Tris堿 121.1g；ddH2O 400ml；用HCl調(diào)pH值至8.9；用ddH2O定容至500ml
貯存：4℃
注：使用前稀釋成1×陽(yáng)極緩沖液使用。
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5. 10×陰極緩沖液（上槽緩沖液）
貨號(hào)：CB010
[1
M Tris; 1 M Tricine ;1% SDS; pH 8.3]
Tris堿 121.14g；Tricine 179.2g；SDS 10 g
用ddH2O溶解，定容至1000
ml(不用調(diào)pH)。
貯存：4℃
注：使用前稀釋成1×陰極緩沖液使用
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6. 染色液
貨號(hào)：RTD6203
冰醋酸 100 ml
考馬斯亮藍(lán)G-250 0.25 g
水 900 ml
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7. 脫色液
貨號(hào)：RTD6204
冰醋酸 100 ml
水 900 ml
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8. 2×Tricine蛋白樣品上樣緩沖液（10ml）
貨號(hào)：TP050
1ml1MTris-HCl pH6.8；2.4
ml 甘油；0.8 g SDS；0.31
g DTT（或者400 μl β-巰基乙醇）；2
mg 考馬斯亮藍(lán)G-250；用滅菌水定容至10ml
混勻分裝-20℃貯存?zhèn)溆?/span>
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多肽電泳配套試劑
使用RTD6145 彩虹預(yù)染超低分子量Marker
II（3-40 kD）產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表：
1. [2022 IF=13.6] Inactivation mechanism of cold plasma combined with 222 nm ultraviolet for
spike protein and its application in disinfecting of SARS-CoV-2
Author: Xiaowei
Sheng, Jin Wang, Luling Zhao, Wenjing Yan, Jing Qian, Zhaobin Wang, Jianhao
Zhang, Vijaya Raghavan
Marker: RTD6145
彩虹預(yù)染超低分子量Marker
II（3-40kD）
Journal: Journal of Hazardous Materials 465 (2024) 133458
Institution: Nanjing
Agricultural University
Paper link： https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.2024.133458