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彩虹預(yù)染超低分子量Marker II(3-40kD)

彩虹預(yù)染超低分子量Marker II(3-40kD)

產(chǎn)品編號(hào):RTD6145-02

產(chǎn)品規(guī)格:50次

相關(guān)規(guī)格:
數(shù)量
價(jià)格 ¥1000

彩虹預(yù)染超低分子量蛋白質(zhì)Marker II3-40 kD

Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight Protein Marker II3-40 kD

產(chǎn)品編號(hào)及規(guī)格:

RTD6145-01   10 T50 μl

RTD6145-02   50 T(250 μl

儲(chǔ)存條件:

  -20保存,有效期12個(gè)月

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

    彩虹預(yù)染超低分子量蛋白質(zhì)Marker II可以直接觀察蛋白電泳及清晰判斷Western Blotting的轉(zhuǎn)膜效果。本產(chǎn)品由9種多肽和蛋白質(zhì)組成,分子量大小為 3 kD4.2 kD,6.5 kD,10 kD(綠色),15 kD,20 kD,25 kD,30 kD,40 kD(紅色) (注:蛋白大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非預(yù)染蛋白Marker標(biāo)定過(guò)。)


● 使用說(shuō)明:

第一次收到該產(chǎn)品,常溫融化后,徹底混勻,離心快甩將溶液完全收集到管底。

. 制膠:

I 配制分離膠

1.按照表一將不同體積的雙蒸水、40% PAA19:1)、凝膠緩沖液和乙二醇加入到小燒杯中混合。

2.加入10%APSTEMED,立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

3.在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液,然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1 cm的無(wú)水乙醇,使凝膠表面保持平整。

4.靜置15-30分鐘,待分離膠和乙醇層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。

表一  (一塊1 mm mini膠用量)

 

分離膠

濃縮膠

 

18T, 5%C /5 ml

5T, 3.3%C/2 ml

40% PAA19:1

2.25 ml

/

40% PAA (29:1)

/

0.25 ml

4×凝膠緩沖液

1.25 ml

0.5 ml

乙二醇(電泳級(jí))

1.5 ml

/

ddH2O

/

1.25ml

10APS

50 μl

20 μl

TEMED

5 μl

2 μl


II 配制濃縮膠

去除覆蓋在分離膠上的乙醇層,用濾紙將殘留乙醇吸去。

1.按照表一將不同體積的雙蒸水、40%PAA(29:1)和凝膠緩沖液加入到小燒杯中混合。

2.加入10%過(guò)硫酸銨和TEMED,立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

3.將梳子插入凝膠內(nèi),避免產(chǎn)生氣泡。

4.靜置30-60分鐘裝待凝膠聚合

. 電泳:

1. Marker樣品,充分混勻后備用。不要加熱處理。

2. 電泳前,將10×陽(yáng)極緩沖液(Cat No:AB080)和10×陰極緩沖液(Cat No:CB010)用蒸餾水稀釋成1×緩沖液備用。將電泳槽的外槽加入1×陽(yáng)極緩沖液,內(nèi)槽加入1×陰極緩沖液,輕柔拔出梳子,將Marker或蛋白樣品(已經(jīng)過(guò)2×Tricine上樣緩沖液[Cat No:TP050]處理)加入點(diǎn)樣孔,參考下表進(jìn)行電泳,至每條帶都清晰可見(jiàn)時(shí)停止電泳。整個(gè)電泳過(guò)程大約需要2-3個(gè)小時(shí)。

表二 多肽電泳條件

恒電壓

150V

起始電流

60-75mA/板膠

結(jié)束電流

15-25mA/板膠

電泳時(shí)間

2.5-3小時(shí)

. 染色

根據(jù)常規(guī)實(shí)驗(yàn)步驟,用配方6和7(表三)進(jìn)行染色和觀察。如果使用配方6進(jìn)行染色時(shí)效果不好或考慮其毒性,請(qǐng)選擇本公司的考馬斯亮藍(lán)蛋白膠快速染色液(Cat NoRTD6201,該產(chǎn)品除具有染色快,無(wú)毒,靈敏性高等特點(diǎn)外,還能對(duì)小肽在染色中起到固定作用,不至于小肽在染色和脫色中從凝膠中脫離,是常規(guī)染色液的理想替代品。

注:預(yù)染蛋白Marker由于嵌合了染料,在不同的凝膠系統(tǒng)中遷移率會(huì)有不同,因此只能用來(lái)粗略估計(jì)目的蛋白的大小。如要精確確定蛋白的大小,請(qǐng)?jiān)谕荒z系統(tǒng)中用非預(yù)染蛋白Marker來(lái)標(biāo)定預(yù)染蛋白Marker的分子量。

表三 小分子蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳試劑配制

1. 40%PAA29:1)(配制濃縮膠)   

貨號(hào): AC2914

   丙稀酰胺       38.67g

   甲叉雙丙稀酰胺 1.33g

 ddH2O溶解后定容至100 ml,過(guò)濾后使用。

貯存:4

2.  40% PAA19:1 (配制分離膠)

貨號(hào):AC1914

丙稀酰胺      38 g

甲叉雙丙稀酰胺 2 g

ddH2O溶解后定容至100 ml,過(guò)濾后使用。

貯存:4

3. 4×凝膠緩沖液(配制凝膠用)

貨號(hào):GB010

[3 M Tris; 0.4% SDS; pH8.45]

Tris 36.3 g;ddH2O 80ml

0.4 g SDS4 ml 10 SDS

HCl調(diào)pH值至8.45;ddH2O定容至100 ml

貯存:4

4. 10×陽(yáng)極緩沖液(下槽緩沖液)

貨號(hào):AB080

[2 M Tris pH8.9]

Tris 121.1g;ddH2O 400ml;HCl調(diào)pH值至8.9ddH2O定容至500ml

貯存:4

注:使用前稀釋成陽(yáng)極緩沖液使用。

5. 10×陰極緩沖液(上槽緩沖液)

貨號(hào):CB010

[1 M Tris; 1 M Tricine ;1% SDS; pH 8.3]

Tris 121.14gTricine 179.2g;SDS 10 g

ddH2O溶解,定容至1000 ml(不用調(diào)pH)。

貯存:4

注:使用前稀釋成陰極緩沖液使用

6. 染色液

貨號(hào):RTD6203

冰醋酸            100 ml

考馬斯亮藍(lán)G-250   0.25 g

                900 ml

 

 

7. 脫色液

貨號(hào):RTD6204

冰醋酸  100 ml

      900 ml

 

8.  2×Tricine蛋白樣品上樣緩沖液(10ml

貨號(hào):TP050

1ml1MTris-HCl pH6.8;2.4 ml 甘油;0.8 g  SDS;0.31 g DTT(或者400 μl β-巰基乙醇);2 mg 考馬斯亮藍(lán)G-250;用滅菌定容至10ml

混勻分裝-20貯存?zhèn)溆?/span>

 

 


多肽電泳配套試劑

名稱(chēng)

貨號(hào)

規(guī)格

超低分子量蛋白電泳試劑盒

RTD6120

10

超低分子量蛋白Marker I3.3-20.1 kD

RTD6101

10次(100 μl

超低分子量蛋白Marker III3.4-100 kD

RTD6125

10次(50 μl

彩虹預(yù)染超低分子量蛋白Marker1.2-45 kD

RTD6110

10 50 μl

  彩虹預(yù)染超低分子量蛋白Marker II3-40 kD

RTD6145-01

10 50 μl

40% PAA19:1

AC1914-01

100ml

40% PAA29:1

AC2914-01

100ml

多肽電泳凝膠緩沖液

GB010-100ml

100ml

2×Tricine 上樣緩沖液(變性,還原)

TP050

10×1ml

FastBlue蛋白染色液

RTD6202

500ml

乙二醇(電泳級(jí))

EA0582-02

100 ml

10×Tris-Tricine-SDS緩沖液(變性電泳,粉末型)

CB010P

500 ml

10×陽(yáng)極緩沖液 (多肽電泳用

AB080

250 ml

10×陰極緩沖液(多肽電泳用)

CB010

100 ml

 


使用RTD6145 彩虹預(yù)染超低分子量Marker II3-40 kD產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表:

 

1. [2022 IF=13.6] Inactivation mechanism of cold plasma combined with 222 nm ultraviolet for spike protein and its application in disinfecting of SARS-CoV-2

Author: Xiaowei Sheng, Jin Wang, Luling Zhao, Wenjing Yan, Jing Qian, Zhaobin Wang, Jianhao Zhang, Vijaya Raghavan

Marker: RTD6145 彩虹預(yù)染超低分子量Marker II(3-40kD)

Journal: Journal of Hazardous Materials 465 (2024) 133458

Institution: Nanjing Agricultural University

Paper link https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.2024.133458


 
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