彩虹預(yù)染超低分子量蛋白質(zhì)Marker II(3-40 kD)
Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight
Protein Marker II(3-40 kD)
●產(chǎn)品編號(hào)及規(guī)格:
RTD6145-01 10 T(50 μl)
RTD6145-02 50 T(250 μl)
● 儲(chǔ)存條件:
-20℃保存,有效期12個(gè)月
● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
彩虹預(yù)染超低分子量蛋白質(zhì)Marker II可以直接觀察蛋白電泳及清晰判斷Western Blotting的轉(zhuǎn)膜效果。本產(chǎn)品由9種多肽和蛋白質(zhì)組成,分子量大小為 3 kD,4.2 kD,6.5 kD,10 kD(綠色),15 kD,20 kD,25 kD,30 kD,40 kD(紅色) (注:蛋白大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非預(yù)染蛋白Marker標(biāo)定過(guò)。)。
● 使用說(shuō)明:
第一次收到該產(chǎn)品,常溫融化后,徹底混勻,離心快甩將溶液完全收集到管底。
一. 制膠:
I 配制分離膠
1.按照表一將不同體積的雙蒸水、40% PAA(19:1)、凝膠緩沖液和乙二醇加入到小燒杯中混合。
2.加入10%APS和TEMED,立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。
3.在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液,然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1
cm的無(wú)水乙醇,使凝膠表面保持平整。
4.靜置15-30分鐘,待分離膠和乙醇層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。
表一 (一塊1 mm mini膠用量)
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分離膠
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濃縮膠
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18%T, 5%C /5 ml
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5%T, 3.3%C/2 ml
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40% PAA(19:1)
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2.25 ml
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/
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40% PAA (29:1)
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/
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0.25 ml
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4×凝膠緩沖液
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1.25 ml
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0.5 ml
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乙二醇(電泳級(jí))
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1.5 ml
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/
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ddH2O
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/
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1.25ml
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10%APS
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50 μl
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20 μl
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TEMED
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5 μl
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2 μl
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II 配制濃縮膠
去除覆蓋在分離膠上的乙醇層,用濾紙將殘留乙醇吸去。
1.按照表一將不同體積的雙蒸水、40%PAA(29:1)和凝膠緩沖液加入到小燒杯中混合。
2.加入10%過(guò)硫酸銨和TEMED,立即混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。
3.將梳子插入凝膠內(nèi),避免產(chǎn)生氣泡。
4.靜置30-60分鐘裝待凝膠聚合
二. 電泳:
1. 取Marker樣品,充分混勻后備用。不要加熱處理。
2. 電泳前,將10×陽(yáng)極緩沖液(Cat No:AB080)和10×陰極緩沖液(Cat No:CB010)用蒸餾水稀釋成1×緩沖液備用。將電泳槽的外槽加入1×陽(yáng)極緩沖液,內(nèi)槽加入1×陰極緩沖液,輕柔拔出梳子,將Marker或蛋白樣品(已經(jīng)過(guò)2×Tricine上樣緩沖液[Cat No:TP050]處理)加入點(diǎn)樣孔,參考下表進(jìn)行電泳,至每條帶都清晰可見(jiàn)時(shí)停止電泳。整個(gè)電泳過(guò)程大約需要2-3個(gè)小時(shí)。
表二 多肽電泳條件
恒電壓
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150V
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起始電流
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60-75mA/板膠
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結(jié)束電流
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15-25mA/板膠
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電泳時(shí)間
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2.5-3小時(shí)
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三. 染色
根據(jù)常規(guī)實(shí)驗(yàn)步驟,用配方6和7(表三)進(jìn)行染色和觀察。如果使用配方6進(jìn)行染色時(shí)效果不好或考慮其毒性,請(qǐng)選擇本公司的考馬斯亮藍(lán)蛋白膠快速染色液(Cat No:RTD6201),該產(chǎn)品除具有染色快,無(wú)毒,靈敏性高等特點(diǎn)外,還能對(duì)小肽在染色中起到固定作用,不至于小肽在染色和脫色中從凝膠中脫離,是常規(guī)染色液的理想替代品。
注:預(yù)染蛋白Marker由于嵌合了染料,在不同的凝膠系統(tǒng)中遷移率會(huì)有不同,因此只能用來(lái)粗略估計(jì)目的蛋白的大小。如要精確確定蛋白的大小,請(qǐng)?jiān)谕荒z系統(tǒng)中用非預(yù)染蛋白Marker來(lái)標(biāo)定預(yù)染蛋白Marker的分子量。
表三 小分子蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳試劑配制
1. 40%PAA(29:1)(配制濃縮膠)
貨號(hào): AC2914
丙稀酰胺 38.67g
甲叉雙丙稀酰胺 1.33g
用ddH2O溶解后定容至100
ml,過(guò)濾后使用。
貯存:4℃
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2. 40% PAA(19:1) (配制分離膠)
貨號(hào):AC1914
丙稀酰胺 38 g
甲叉雙丙稀酰胺 2 g
用ddH2O溶解后定容至100
ml,過(guò)濾后使用。
貯存:4℃
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3. 4×凝膠緩沖液(配制凝膠用)
貨號(hào):GB010
[3 M Tris; 0.4% SDS; pH8.45]
Tris堿 36.3 g;ddH2O 80ml
0.4
g SDS或4 ml 10% SDS
用HCl調(diào)pH值至8.45;用ddH2O定容至100
ml
貯存:4℃
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4. 10×陽(yáng)極緩沖液(下槽緩沖液)
貨號(hào):AB080
[2
M Tris pH8.9]
Tris堿 121.1g;ddH2O 400ml;用HCl調(diào)pH值至8.9;用ddH2O定容至500ml
貯存:4℃
注:使用前稀釋成1×陽(yáng)極緩沖液使用。
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5. 10×陰極緩沖液(上槽緩沖液)
貨號(hào):CB010
[1
M Tris; 1 M Tricine ;1% SDS; pH 8.3]
Tris堿 121.14g;Tricine 179.2g;SDS 10 g
用ddH2O溶解,定容至1000
ml(不用調(diào)pH)。
貯存:4℃
注:使用前稀釋成1×陰極緩沖液使用
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6. 染色液
貨號(hào):RTD6203
冰醋酸 100 ml
考馬斯亮藍(lán)G-250 0.25 g
水 900 ml
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7. 脫色液
貨號(hào):RTD6204
冰醋酸 100 ml
水 900 ml
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8. 2×Tricine蛋白樣品上樣緩沖液(10ml)
貨號(hào):TP050
1ml1MTris-HCl pH6.8;2.4
ml 甘油;0.8 g SDS;0.31
g DTT(或者400 μl β-巰基乙醇);2
mg 考馬斯亮藍(lán)G-250;用滅菌水定容至10ml
混勻分裝-20℃貯存?zhèn)溆?/span>
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多肽電泳配套試劑
使用RTD6145 彩虹預(yù)染超低分子量Marker
II(3-40 kD)產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表:
1. [2022 IF=13.6] Inactivation mechanism of cold plasma combined with 222 nm ultraviolet for
spike protein and its application in disinfecting of SARS-CoV-2
Author: Xiaowei
Sheng, Jin Wang, Luling Zhao, Wenjing Yan, Jing Qian, Zhaobin Wang, Jianhao
Zhang, Vijaya Raghavan
Marker: RTD6145
彩虹預(yù)染超低分子量Marker
II(3-40kD)
Journal: Journal of Hazardous Materials 465 (2024) 133458
Institution: Nanjing
Agricultural University
Paper link: https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.2024.133458